۱-۷-۸درمان بیولوژیکی………………………………………………………………………………………………………………………………………….۱۴
۱-۷-۹ پرتو درمانی………………………………………………………………………………………………………………………………………………۱۴
۱-۷-۹-۱ انواع درمان با اشعه………………………………………………………………………………………………………………………………….۱۴
۱-۸ ALCAM……………………………………………………………………………………………………………………………………………………۱۵
۱-۹ویژگی های عمومیALCAM………………………………………………………………………………………………………………………….۱۵
۱-۱۰شناساییALCAM به عنوان یک هدف با انکولوژی………………………………………………………………………………………۱۶
مساله تحقیق………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۱۹
فصل دوم:مروری بر تحقیقات انجام شده
۲-۱ نقش ALCAM در درمان سرطان………………………………………………………………………………………………………………….۲۰
فصل سوم: مواد و روش ها
۳-۱ مواد مورد استفاده……………………………………………………………………………………………………………………………………………۲۳
۳-۱-۱ باکتری مورد استفاده …………………………………………………………………………………………………………………………………۲۳
۳-۱-۲ پلاسمید ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………۲۳
۳-۱-۳ انزیم ها …………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۲۳
۳-۱-۴ کیت های ازمایشگاهی. ………………………………………………………………………………………………………………………………۲۴
۳-۱-۵ انتی بیوتیک ها. ………………………………………………………………………………………………………………………………………….۲۴
۳-۱-۶ محیط کشت باکتری …………………………………………………………………………………………………………………………………۲۵
۳-۱-۷ ژل الکتروفورز……………………………………………………………………………………………………………………………………………۲۵
۳-۱-۸ مواد شیمیایی. …………………………………………………………………………………………………………………………………………….۲۵
۳-۱-۹ وسایل و تجهیزات آزمایشگاهی …………………………………………………………………………………………………………………۲۵
۳-۲ انالیز بیوانفورماتیکی ناحیه C2 پروتئین ALCAM. ………………………………………………………………………………………….۲۹
۳-۲-۱ استخراج توالی ناحیه C2 پروتئیین ALCAM ………………………………………………………………………………………………۲۹
۳-۲-۲ بهینه سازی توالی یا Optimization …………………………………………………………………………………………………………۲۹
۳-۳ سنتز شیمیایی DNA ناحیهC2 پروتئین ALCAM ……………………………………………………………………………………………….۲۹
۳-۳-۱ سنتز شیمیایی ژن نوترکیب ……………………………………………………………………………………………………………………………۲۹
۳-۳-۲ پایداری و شرایط نگهداری DNA سنتز شده ……………………………………………………………………………………………………۳۰
۳-۳-۳ محلول سازی DNA لیوفیلیزه………………………………………………………………………………………………………………………….۳۰
۳-۴ کلونینگ پلاسمید- AMP+ pBSK حاوی DNA ناحیهC2 پروتئینALCAM ………………………………………………۳۰
۳-۴-۱ آماده سازی باکتری شایسته…………………………………………………………………………………………………………………………۳۰
۳-۴-۱-۱ مواد و محلول ها…………………………………………………………………………………………………………………………………….۳۰
۳-۴-۱-۲ روش کار………………………………………………………………………………………………………………………………………………۳۰
۳-۴-۲ ترانسفورماسیون پلاسمید به سلول های مستعد TOP10 E.coli ………………………………………………………………۳۱
۳-۴-۲-۱ روش کار……………………………………………………………………………………………………………………………………………۳۱
۳-۴-۳ ارزیابی کلونی ها………………………………………………………………………………………………………………………………………۳۲
۳-۴-۴ استخراج پلاسمید – AMP+ pBSK حاوی DNA ناحیه C2……………………………………………………………………۳۳
۳-۴-۵ تایید آنزیمی پلاسمید استخراج شده……………………………………………………………………………………………………………۳۵
۳-۴-۵-۱ هضم آنزیمی دوگانه یا Double digestion…………………………………………………………………………………………۳۵
۳-۴-۵-۲ الکتروفورز…………………………………………………………………………………………………………………………………………….۳۵
۳-۵ ساب کلونینگ ژن ناحیهC2 پروتئین ALCAM……………………………………………………………………………………………….۳۷
۳-۵-۱ تخلیص DNA ناحیهC2 از ژل………………………………………………………………………………………………………………….۳۷
۳-۵-۲ لایگیشن…………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۳۸
۳-۵-۳ ترانسفورماسیون………………………………………………………………………………………………………………………………………….۳۹
۳-۵-۳-۱ آماده سازی سلول های شایسته…………………………………………………………………………………………………………………۳۹
۳-۵-۳-۲ ترانسفورماسیون سلول های شایسته E.coli BL21(DE3) با محصول لایگیشن…………………………………………۴۰
۳-۵-۴ ارزیابی کلونی ها………………………………………………………………………………………………………………………………………۴۰
۳-۵-۵ استخراج پلاسمید بیانی pet-28a حاوی ژن ناحیهC2 پروتئین ALCAM……………………………………………………۴۱
۳-۵-۶ تایید آنزیمی پلاسمید استخراج شده……………………………………………………………………………………………………………۴۲
۳-۶ بیان پروتئین مولتی توپ EpCAM………………………………………………………………………………………………………………۴۳
۳-۶-۱ القاء بیان پروتئین………………………………………………………………………………………………………………………………………۴۳
۳-۶-۲ بررسی بیان به کمک تکنیک SDS-page…………………………………………………………………………………………………….۴۳
۳-۶-۲-۱ روش ساخت محلول ها و ژل ها……………………………………………………………………………………………………………۴۴
۳-۶-۲-۲ Run کردن نمونه ها……………………………………………………………………………………………………………………………۴۵
۳-۶-۲-۳ رنگ آمیزی با کوماسی G-250 کلوئیدی………………………………………………………………………………………………….۴۵
فصل چهارم:نتایج
۴-۱ نتایج حاصل از بهینه سازی توالی ………………………………………………………………………………………………………………………….۴۷
C2ناحیهDNA4-2 سنتز شیمیایی………………………………………………………………………………………………….۵۰
۴-۳کلونینگ پلاسمید AMP+ -pBSK حاویDNA ناحیهC2…………………………………………………………………………………….۵۲
۴-۴ ساب کلونینگ ژن ناحیه C2……………………………………………………………………………………………………………………………….۵۴
۴-۵بیان پروتئینC2 و تایید آن به کمک تکنیک SDS_page…………………………………………………………………………………………۵۷
فصل پنجم:
بحث…………………………………………………………………………………………………………………………۵۹
نتیجه گیری………………………………………………………………………………………………………………………………۶۹
منابع…………………………………………………………………………………………………………………………………………۷۱
چکیده انگلیسی………………………………………………………………………………………………………………………………۷۴
فهرست شکل ها:
شکل ۱-۱ تصویر بخش های مختلف روده بزرگ………………………………………………………………………………………………………۵
شکل۱-۲ نمای کلی روده بزرگ، روده کوچک و معده……………………………………………………………………………………………….۶
شکل۱-۳ درصد فراوانی محل آناتومیک سرطان کولورکتال ………………………………………………………………………………………۷
شکل۱-۴ درصد فراوانی مراحل سرطان کولورکتال…………………………………………………………………………………………………۱۲
شکل۱-۵ نقشه ژنتیکی پروتئین ALCAM…………………………………………………………………………………………………………….۱۵
شکل۱-۶ رنگ آمیزی ایمنوهیستوشیمیایی ALCAM در بافت توموری…………………………………………………………………….۱۷
شکل۳-۱ نقشه ژنی پلاسمید Pet28a…………………………………………………………………………………………………………………….۲۴
شکل۳-۲ دستگاه انکوباتور……………………………………………………………………………………………………………………………………۲۵
شکل۳-۳ دستگاه اتوکلاو………………………………………………………………………………………………………………………………………۲۶
شکل۳-۴ دستگاه مولد ولتاژو تانک الکتروفورز………………………………………………………………………………………………………۲۶
شکل۳-۵ شیکر انکی باتور…………………………………………………………………………………………………………………………………….۲۷
شکل۳-۶ سانتریفیوژ……………………………………………………………………………………………………………………………………………۲۷
شکل۳-۷ دستگاه تصویر ساز ژل……………………………………………………………………………………………………………………………۲۷
شکل۳-۸ ترموسایکلر……………………………………………………………………………………………………………………………………………۲۸
شکل۳-۹ بن ماری ………………………………………………………………………………………………………………………………………………۲۸
شکل۳-۱۰ کیت استخراج پلاسمید…………………………………………………………………………………………………………………………۳۳
شکل۳-۱۱ کیت استخراج DNA از ژل فرمانتاز………………………………………………………………………………………………………۳۷
شکل۴-۱ شاخص سازی کدون. سمت راست: قبل از بهینه سازی سمت چپ: بعد از بهینه سازی…………………………………۴۸
شکل۴-۲ میزان فراوانی کدون های بهینه. سمت چپ: قبل از بهینه سازی سمت راست:بعد از بهینه سازی ……………………۴۸
شکل۴-۳ شاخص سازی محتوای G-C سمت راست:قبل از بهینه سازی سمت چپ: بعد از بهینه سازی………………………۴۹
شکل۴-۴ترادف ناحیهC2 مورد نظر پس از بهینه سازی کدون های مربوطه جهت بیان در میزبان E.coli………………………۴۹
شکل۴-۵ مقایسه نوکلئوتید بصورت نظیر به نظیر در توالی های اولیه و بهینه سازی شده……………………………………………….۵۰
شکل۴-۶ تائید اندازه ژن سنتز شده به کمک هضم آنزیمی…………………………………………………………………………………………۵۱
شکل۴-۷ نقشه ژنی پلاسمید حاوی DNA ناحیه C2 پروتئینALCAM…………………………………………………………………۵۳
شکل۴-۸ تائید حضور پلاسمید حاوی ژن ناحیه C2 در محصول استخراج پلاسمید…………………………………………………….۵۳
شکل۴-۹ هضم دوگانه آنزیمی پلاسمید تکثیر یافتهPBSK……………………………………………………………………………………….۵۴
شکل۴-۱۰ نقشه ژنی پلاسمید Pet28a………………………………………………………………………………………………………………….۵۵
شکل۴-۱۱ باکتری های BL21(DE3) ترانسفورم شده با Pet28a حاوی ژن ناحیه C2…………………………………………….۵۵
شکل۴-۱۲ تائید حضور پلاسمید Pet28a حاوی ژن ناحیه C2 در باکتری ترانسفورم شده BL21(DE3) ………………….۵۶
شکل۴-۱۳ نتیجه حاصلهاز هضم آنزیمی دوگانه پلاسمید Pet28a حاوی ژن ناحیه C2………………………………………………۵۷
شکل۴-۱۴ بررسی بیان پروتئین ناحیه C2 به کمک تکنیک SDS-Page………………………………………………………….۵۸
چکیده:
همه سرطان ها از سلول ها شروع می شوند به طور طبیعی، سلول ها به گونه ای که بدن به آنها نیاز دارد، رشد می کنند و تقسیم می شوند. سلول های جدید زمانی که ومی به وجود آنها نیست، به وجود می آیند و یا سلول های پیر در زمان مرگ به حیات خود ادامه می دهند. این سلول های اضافی توده بافتی به نام تومور تشکیل می دهند.
سرطان کولورکتال یکی از شایع ترین سرطان های بدخیم در سرتاسر جهان می باشد که میزان ابتلا به آن حدود ۶/۰ می باشد که منجر به مرگ۶۰۰ هزار نفر در سال می گردد. .CD166 به عنوان مارکر سلول های بنیادی سرطان کولورکتال شناسایی و معرفی شده است.که با توجه به بیان آن بر سطح سلول های سرطان کولورکتال در مراحل مختلف بیماری می توان از آن جهت کارهای درمانی و تشخیصی استفاده نمود.
ALCAM مارکر تشخیصی مثبتی برای بقای کلی بیماران مبتلا به سرطان کولورکتال می باشد و شناسایی آن ممکن است به بهینه سازی سیتسم مرحله بندی تشخیصی موجود کمک
جستجوی مقالات فارسی – آزادی اطلاعات در پرتو حقوق اساسی جمهوری اسلامی ایران و فقه امامیه
دسترسی به منابع مقالات : کارشناسی ارشد ادغام شرکت‌های خصوصی و دولتی در حقوق ایران
,۳ ,۱ ,۴ ,۲ ,۵ , ۳ , شکل۴ ,۳ ۱ , شکل۳ ,۳ ۴ ,پلاسمید استخراج شده…………………………………………………………………………………………………………… ,آنزیمی پلاسمید استخراج ,تایید آنزیمی پلاسمید ,ارزیابی کلونی ها………………………………………………………………………………………………………………………………………
درباره این سایت